慢病毒（lentivirus , LV）属于逆转录病毒科，该种病毒感染个体的潜伏期长达数年，之后缓慢发病，因此这些病原体被称为慢病毒。慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体，是目前细胞及模式生物实验中非常有效的工具，在基因转染方面有着许多独特的优势，对分裂细胞和非分裂细胞均能够有效感染，可容纳较大基因片段，同时能够将携带的基因稳定的整合到基因组中等优势，慢病毒包装逐渐成为科研必备的实验技能之一，多用于感染各种肿瘤细胞，建立稳定表达或沉默目的蛋白的细胞株。此外，我们还可以构建真核、原核表达载体；提供高滴度慢病毒液。

1.过表达载体

①根据启动子来选择载体：对于哺乳动物细胞来说，常见载体的泛表达启动子常见的基本包括CMV, SV40, EF1a, CAG。大部分都选择CMV、CAG或者EF1a其中之一即可，SV40表达能力稍弱。

②根据载体选择标记 (Selectable Markers) 来选择载体：载体的选择标记主要目的是区分表达于非表达目的基因的细胞。比较常用的选择标记有Puromycin、Blasticidin、 Neomycin、 Zeocin和各种荧光蛋白如ZsGreen、EGFP、 RFP mCherry等，我们一个基因通常只需选一种即可。

2.干扰载体

这类载体的选择要简单很多，启动子选择U6、CMV即可。但标记选择通常跟过表达类似，尽量选Puromycin和ZsGreen。

细胞株构建服务包括目的基因表达慢病毒载体构建、病毒包装、细胞转染、稳转细胞株筛选和细胞株鉴定等5个实验流程。其中慢病毒载体构建、病毒包装、细胞转染等步骤进展比较快，在稳转细胞株筛选及鉴定这步需要较长的时间，为了保证细胞株进行多次传代后，仍然保持其遗传稳定性，我们通过流式细胞仪或者抗性标记筛选出100-200个高水平表达克隆，并从中挑选最佳3-5个高产克隆细胞，这些克隆细胞在温暖的培养环境中慢慢地分裂成2个、4个、8个.....终于在10-15天的时候长成一个细胞团，这个时候为了保证克隆细胞的稳定性，技术人员将对该细胞团进行第二轮的亚克隆，甚至要进行第三轮亚克隆就能挑选出稳定表达的单克隆细胞。