Confocal 利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测,来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上,该点所发射的荧光成像在探测针孔上,该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的,因此被探测点即共焦点,被探测点所在的平面即共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上,为了产生一幅完整的图像,由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描,从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动,将样品新的一个层面移动到共焦平面上,样品的新层面又成像在显示器上,随着Z轴的不断移动,就可得到样品不同层面连续的光切图像 。
1. 样品量
5000 rpm离心10 min,可得到绿豆大小沉淀,参考图(1.5 mL离心管)大小的菌体沉淀。
2. 寄送要求
(1)若为细菌类需要死活染色/ROS染色的,一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触。
(2)若为蛋白/多糖类染色,一般加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存,样品不和冰袋接触。
(3)若为污泥类样品可以进行冰切或者刀切,冰切收费50/样。
1. 样品量
金属/瓷砖/岩石等块体类建议长宽高尺寸不超过1 cm,薄膜类直径尺寸不超过2 cm;且均要求样品表面平整,需要标出拍摄面。
2. 寄送要求
(1)一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触;
(2)若在爬片上培养生物膜,可将爬片粘于培养皿底部,充满培养基,封口膜密封完全,再4度保存。
1. 说明:
(1)植物类样品可进行简单冰切及刀切,软化等特殊类请走病理组织切片测试项目;
(2)一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触;
(3)平台做过的植物类样品淀粉、胡萝卜,土豆、叶片、根、茎,拟南芥等。
1. 送样量
(1)与细胞的作用方式为直接接触的话,至少1个/种细胞/时间点;
(2)样本处理方式为浸提的话,可参考国标ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提,根据浸提方式按量和检测时间点提供;
2. 制样要求
若是需要把细胞接种到材料上的话,金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形,建议制备直径为10-15 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪,默认制备直径为15 mm。
送样量:根据测试时样本浓度和检测时间点而定,按照单次检测需要的 3-5倍的量 寄送。
a. 若采用稀释后样本测试,则须告知稀释倍数及工作液浓度;
b. 若溶剂为有机溶剂(如DMSO,醇类,酚类等),最高工作液浓度中,溶剂的占比低于0.5%。
送样量:根据测试时样本浓度和检测时间点而定,按照单次检测需要的3-5倍的量寄送;
a. 若为可溶性粉末:注明溶剂的种类(如无水乙醇,异丙醇,DMSO,培养基,PBS或者生盐水等),当样品对溶剂有特殊需求时,请在送样时附加所需溶剂;
b. 若为不可溶粉末:注明样本性质,灭菌方式,及分散为均匀悬浮液所需必要步骤。
1. 细胞类样品直接拍摄,需要封片后常温避光邮寄。
2. 固体类直接拍摄样品建议长宽不超过20mm,厚度不超过10mm,重量不超过10g,一定标出测试面。
3. 微米材料直接拍摄类建议进行云视频沟通,且微粒尺寸不低于5微米。
1. 激发和发射波长说明:需要提供清楚激发/发射波长,拍摄类型2D/3D,拍摄倍数等要求;
2. 染料说明:需要您标明染料名称和拍摄条件(激发/发射波长)。
405nm,458nm,488nm,515nm,559nm,635nm,其他激光器需要单独联系。
染料名称 | 染色剂使用费 | 最大激发波长(nm) | 激发器波长(nm) | 发射波长/范围(nm) | 结合物质 |
Hoechst33342 | 20 | 352 | 350 | 454 | 细胞核染料 |
DAPI | 20 | 359 | 405 | 457 | 可染DNA/RNA |
H33342 | 20 | 352 | 405 | 454 | 可染DNA、核酸 |
Hoechst33258 | 20 | 352 | 405 | 454 | 细胞核染料 |
AO染色液 | 20 | 490 | 488 | 与DNA的结合,其荧光发射峰为530nm;与RNA的结合,其荧光发射峰为640nm | DNA/RNA |
CFSE | 20 | 498 | 488 | 517 | 染活细胞 |
溶酶体绿色荧光探针 | 150 | 501 | 488 | 509 | 溶酶体 |
FITC | 20 | 491 | 488 | 516 | 非特异性蛋白染料可染蛋白/氨基酸/糖类 |
Nile red (NR) | 20 | 559 | 559 | 635 | 可染脂质 |
PI | 20 | 537 | 514(559) | 615 | 可染细胞核 |
罗丹明B | 20 | 546 | 561 | 580 | 非特异性蛋白染料 |
耐尔蓝A | 20 | 631 | 633 | 660 | 非特异性蛋白 |
溶酶体红色荧光探针 | 150 | 561 | 561 | 592 | 溶酶体 |
线粒体绿色荧光探针 | 150 | 490 | 488 | 512 | 线粒体 |
线粒体红色荧光探针 | 150 | 578 | 561 | 598 | 线粒体 |
线粒体深红色荧光探针 | 150 | 641 | 633 | 662 | 线粒体 |
SYBR GreenⅠ | 50 | 498 | 488 | 522 | 核酸 |
罗丹明123 | 50 | 508 | 488 | 528 | 测线粒体膜电位 |
FITC-鬼笔环肽 | 100 | 491 | 488 | 516 | 可染细胞骨架 |
DCFH-DA | 50 | 504 | 488 | 525 | 可染ROS |
Calcein-AM/PI | 50 | 501(537) | 488(559) | 521(615) | 可染活细胞/死细胞 |
ConA-FITC | 50 | 491 | 488 | 516 | α多糖 |
ConA-iFlour 555 | 50 | 557 | 561 | 570 | α多糖 |
ConA-Alexa Fluor 594 | 50 | 590 | 561 | 618 | α多糖 |
Calcofluor white | 50 | 350 | 405 | 432 | 可染β-D-吡喃葡萄糖多糖 |
DiD | 50 | 646 | 633 | 663 | 细胞膜染料 |
Dil-细胞膜橙红色荧光探针 | 50 | 550 | 561 | 567 | 细胞膜染料 |
DiO-细胞膜绿色荧光探针 | 50 | 483 | 488 | 501 | 细胞膜染料 |
SF633标记鬼笔环肽 | 100 | 630 | 633 | 650 | 细胞骨架 |
罗丹明-鬼笔环肽 | 100 | 540 | 514 | 565 | 可染F-肌动蛋白 |
Syto63 | 100 | 657 | 633 | 673 | 可染全部细胞 |
Syto9 | 100 | 485 | 488 | 498 | 可染DNA/RNA |
Syto9/PI | 100 | 485(537) | 488(559) | 521(616) | 可染活细菌/死细菌 |
荧光染料激发/发射波长参考于https://www.aatbio.com/fluorescence-excitation-emission-spectrum-graph-viewer |
浸提液制备标准-表面积/浸提液体积 | ||
厚度(mm) | 浸提比例 (表面积或体积) ±10% | 材料形式举例 |
<0.5 | 6 cm2/ml | 薄膜 |
0.5-1.0 | 3 cm2/ml | 金属薄片、硅片 |
>1.0 | 1.25 cm2/ml | 金属块 |
不规则固体材料 | 0.2 g/ml | 粉末、粒状、泡沫、非吸收剂 |
不规则多孔材料 (低密度材料) | 0.1 g/ml | 薄膜、海绵 |
注意:目前还没有标准的浸提方法来测试吸收剂和吸水溶胀的水溶胶类样本。 |