细胞毒性检测是生物相容性测试的一种，检测药物或者新型材料在生物环境中的毒性情况，即通过检测材料或者药物对细胞的增殖或者生长的影响，来评价药物或材料的毒性或者活性，主要用于药物活性筛选、细胞增殖/毒性测定、抗肿瘤药效计算IC50等；常用MTT法或者CCK8法检测，另外也可以通过Live/dead双染法进行细胞成像，更直观的记录细胞的存活情况。

（一）CCK8测试

1. 实验原理

CCK-8（cell-counting kit-8）检测试剂盒是应用WST-8取代MTT被还原，WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。应用酶标仪测定吸光值（450nm）并进行统计学计算便可以获得细胞毒性相关数据。

2. 参考标准

GBT16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验；

ISO 10993-12 2007；

3. 实验流程图

（二）MTT测试

1. 实验原理

哺乳动物胞的线粒体酶可将黄绿色的MTT降解形成蓝紫色的物质，用二甲基亚砜（DMSO）将其溶解成溶液，用酶标仪测定其浓度（570nm），从而定量测定细胞的存活比例。

2. 实验流程图

一、细胞毒性交付结果

1. 交付内容

（1）将各组吸光度值输入Excel并计算相对活力（相对活力%=实验组OD值/对照组OD值均值×100%，将相对活力数值输入GraphPad Prism作图，结果如下：

                                     <图1>  不同浓度下细胞的相对存活率，注：与control组比较，**P＜0.01

二、细胞死活染色-激光共聚焦交付结果

1. 交付内容

2D模式拍摄：每个样品3-4张图片，其中①若一个样品拍摄1个倍数，拍4个视野②若一个样品拍摄2个倍数，各拍摄2个视野③若一个样品拍摄3个倍数，各拍摄1个视野。

2. 结果展示

 <图2>  荧光显微镜下live/dead染色显示死细胞及或细胞分布

 <图3>  激光共聚焦扫描显微镜下live/dead染色显示死细胞及或细胞分布

1. 块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等

（1）送样量：a. 与细胞的作用方式为直接接触的话，至少3个/种细胞/时间点；b.样本处理方式为浸提的话，可参考国标ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提，根据浸提方式按量和检测时间点提供；

（2）制样要求：若是需要把细胞接种到材料上的话，金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形，建议制备直径为5-7 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪，默认制备直径为6 mm。

2. 液体类

送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；若采用稀释后样本测试，则须告知稀释倍数及工作液浓度；若溶剂为有机溶剂（如DMSO，醇类，酚类等），最高工作液浓度中，溶剂的占比低于0.5%。

3. 粉末类

送样量：根据测试时样本浓度和检测时间点而定，按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；其中：

a. 可溶性粉末：注明溶剂的种类（如无水乙醇，异丙醇，DMSO，培养基，PBS或者生盐水等），当样品对溶剂有特殊需求时，请在送样时附加所需溶剂；

b. 不可溶粉末：注明样本性质，灭菌方式，及分散为均匀悬浮液所需必要步骤，

<如果不可使用分散液，需要预试，样本量可联系本公司人员确认>

注：测试时，默认每组3个平行，每孔培养基加样量100μL。