负染色技术是一种制备电子显微镜样品图像呈现复反差的技术。用于观察样品中的颗粒性物质或生物大分子。用金属盐(如磷钨酸钠、醋酸铀等)对铺展在载网上的样品进行染色,使整个载网都铺上一层重金属盐,而有凸出颗粒的地方则没有染料沉积。由于电子密度高的重金属盐包埋了样品中低电子密度的背景,增强了背景散射电子的能力以提高反差,在图像中背景是黑暗的,而未被包埋的样品颗粒则透明光亮,这种染色方法称为负染技术。负染色是只染背景而不染样品,与光学显微镜样品的染色正好相反。目前最常用的负染液是醋酸铀或者磷钨酸,此外甲酸铀、硅钨酸、钼酸铵等也常作负染色剂用。
2.吸取样品10 μL滴加于铜网上沉淀1 min,滤纸吸去浮液。
3.醋酸双氧铀10 μL滴加于铜网上沉淀1 min,滤纸吸去浮液。
4.常温干燥数分钟。
5.80-120 kv进行电镜检测成像。
6.获得透射电镜成像结果。
送样须知
1.可接收样品类型:蛋白、纤维素、脂类、外泌体、细菌等,其他类型样品请咨询科学指南针工作人员。
①液体样品提供100-200μl,提供合适的浓度(上机前直接滴加样品,不做稀释或浓缩);
②粉末样品20mg左右,并告知配置比例;
③外泌体样品50μL,干冰运输寄送(不少于15kg干冰);
④病毒要灭活后寄送,4℃运输寄送;
⑤细菌样品,4℃运输寄送。
2. 样品注意运输方式,需要冰袋或者干冰运输的请提前说明,并附详细送检要求的预约单和送样单。
负染色的效果可能受到样本的运输时间影响,如需负染色,关于样本准备和测试安排,请提前沟通。
服务周期:
一般为样品接收后的1-2周左右,如遇法定假期需要顺延,具体实验周期及送样时间请与科学指南针工作人员沟通确认,谢谢!
交付内容:
每样提供6张拍摄图片(不提供分析服务),如需照片数量超过6张将产生额外费用;
结果反馈请在测试完成一周内,不建议回收样品,如有需要请提前反馈给科奥工作人员。
液体样品提供100-200μl,提供合适的浓度(上机前直接滴加样品,不做稀释或浓缩);粉末样品20mg左右,并告知配置比例。
根据样品的保存条件,常温保存可直接寄送;4℃保存可以加2-3个冰袋寄送,冰袋一定不要直接接触样品管,用泡沫包裹样品,避免样品结冰,注意冰袋融化不要弄湿预约单、样品管上编号,编号需要按照送样单上的编号,尽量简化编号。
如果是外泌体样品需要干冰寄送,干冰消耗量以每天7kg/d计算,保证足够量的干冰。
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